PRODUCING PDA MEDIUM
Nuôi cấy mô nấm
Chọn mô nuôi cấy
Cấy chuyển từ môi trường PDA sang PDA
Nuôi cấy mô nấm
1. Chuẩn bị nguyên liệu:
Khoai tây: 200 gr.
Đường Dextrose: 20 gr.
Thạch Agar: 20 gr.
Nước: 1 l.ít
Bông không thấm nước
Ghi chú:
- Nếu không có đường Dextrose thì mua đường mía, sacharose thay thễ cũng được.
- Thạch và bông mua ở siêu thị chú ý loại Agarose nguyên chất.
- Khoai tây chọn loại không bị thối, ...
2. Khoai tây rửa sạch và cắt thành hình khối một cm;
3. chọn và rửa sạch chai lọ để dùng (có thể dùng chai whiskey hoặc chai coca, sữa đậu nành - thủy tinh trắng).
4. Cho khoai vào nồi, thêm nước vừa đủ một lít, đun sôi khoảng 15 đến 20 phút;
5. Gạn lấy dịch trong (nước chiết khoai tây), thêm nước đến 1 lít
6. Mang vào bếp. thêm Đường, Agar - khuấy đều tay vad đun nhỏ lửa cho tan hết
7. Chia và các chai, mỗi chai 5 - 10 mm môi trường.
8. Đậy bằng bông không thấm nước.
9. Khử trùng ở121oC trong 20 - 30 phút. Để nguội nồi đến 37oC.
10. Đặt nghiêng (như hình) các chai để môi trường lan đều sao cho môi trường không chạm vào nút bông. Khi môi trường trong chai đã đông hẳn, cất vào nơi khô ráo, sạch sẽ để dùng dần.
11. Để một vài bình ra ngoài môi trường để kiểm tra. Nêu sau một thời gian thấy các nốt, hoặc đốm trên bề mặt thạch là môi trường chưa hoan toàn được tiệt trùng
Chọn mô nấm để nuôi cấy
1. Chuẩn bị nguyên liệu:
- Dao mổ chuyên dụng, kẹp ... đã khử trùng
- Đèn cồn
- Cồn 70 độ
- không thấm nước
- Bật lửa
- Các chai đã có môi trường PDA
- Tủ cấy
- Đèn UV
2. Chọn mô nấm khỏe mạnh để nuôi cấy.
- Cây nấm khỏe.
- Không quá già, không quá non.
- Không quá ẩm (ít nhất 2-3 giờ sau khi tưới)
- Thân cứng
- Không nhiễm các loại nấm khác.
3. Làm sạch phòng và tất cả các dụng cụ cần thiết, bên trong và ngoài tủ cấy bằng cồn. Chuyển các chai môi trường PDA, dụng cụ cần thiết vào khoang.
4. Đặt tất cả dụng cụ và đồ dùng cần thiết vào khoang, Bật đèn tia cực tím, quạt thoong gió tủ cấy . Sau 10-15 phút, tắt đèn UV, để lại quạt thông gió suốt thời gian sử dụng.
5. Rửa hai tay bẳng cồn.
6. Giữ dao cắt bằng hai ngón tay, nghiêng 45o trên ngon lửa đèn cồn cho đến khi lưỡi dao hồng lên.
7. Trong khi chờ nguội, (15-20 giây - giữ cho dao không chạm vào bất kỳ bề mặt nào - có thể cắm ngước cán vào cốc đã chuẩn bị trước).
8. Dùng tay xé cây nấm theo chiều dọc - không dùng dao
9. Dùng dao cắt một mẩu nhỏ (2 mm x 2 mm) mô nấm - vị trí giữa mú nấm và thân nấm. lấy ở giữa, để chắc chắn mẫu sạch và không nhiềm các loại vi sinh vật khác
10. Hơ miệng hcai quanh ngọn lửa đèn cồn. Dùng tay khác mở nút bông trước đèn cồn
11. Đưa mẫu vừa cắt vào giữa bề mặt môi trường PDA trong chai - không chạm mẫu vào thành chai
12. Hơ miệng chai một lần nữa và đậy lại nút bông - vẫn để gần ngọn lửa
Chú ý: Đáy chai luôn để thấp hơn miệng chai và gần ngọn lửa trong suốt quá trình thao tác.
13. Dán nhãn: Ngày tháng, tên loại nấm.
Cấy chuyển từ môi trường PDA sang PDA
Khi cấy vào môi trường PDA, hệ sợi phát triển khoảng 15 ngày . (Tùy thuộc vào loài).
9. Dùng dao cát một mẩu nhỏ (5 mm x 5 mm) hệ sợi nấm trên môi trường PDA .
10. Hơ miệng bình, tháo nút bông (giống hình).
11. Đưa miếng môi trường có chúa hệ sợi nấm vào giữa bề mặt thạch trong chai
12. Đậy nút bông ở gần ngọ lửa.
13. Dán nhãn, ghi đầy đủ thông tin như trên.
14. Thời gian nuôi cấy khoảng 10 - 15 ngày, tùy loại
15. Để các chai có sợ nấm phát triển nơi khô ráo, sạch sẽ. Kiểm tra sự phát triển hàng ngày
16. Khi sợi nấm lan kín môi trường, lưu giũ trong ngăn mát tủ lạnh.
17. Kiểm tra các chai đối chưangs để xác định nguyên nhân gây nhiễm, phòng các tác nhân này ở những lầ sau.
18. Ghi chép lại đầy đủ các thông tin quan sát được
